环境与健康杂志２０１６年９月第３３卷第９期Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．９ ・８１７・ ・技术与方法・ 化妆品中大肠埃希菌的固定底物酶底物检测法 高飞 ，白东亭 ，黄杰 ，王钢力 ，陈西平 ，崔生辉・ １．中国食品药品检定研究院食品化妆品所，北京１０００５０；２．中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所 摘要：目的 比较酶底物定量法（Ｃｏｌｉｌｅｒｔ法）与标准平板计数法用于化妆品中大肠埃希菌检测时的等效性。方法选用乳 剂、霜剂、粉剂三种不同性状的检测合格的送检化妆品，用大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２分别加标于三种化妆品中，用生理盐 水和添加Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂的生理盐水进行稀释后检测，结果采用《化妆品卫生规范｝（２００７）中规定的化妆品菌落总数的检验 方法进行计数分析。结果通过对６０件化妆品样品的检测，大肠埃希菌两种稀释液检测计数结果差异无统计学意义（ ＝ １．４２１，Ｐ＞０．０５），且相关性较高（ｒ＝０．９７）；乳剂化妆品（ｔ＝０．１３６，Ｐ＞０．０５）、霜剂化妆品（ｔ＝１．１６３，Ｐ＞０．０５）、粉剂化妆品（ ＝ ０．０３６，Ｐ＞０．０５）中大肠埃希菌两种稀释液检测计数结果差异均无统计学意义；通过对３０株大肠埃希菌的检测，两种方法 的检出限差异无统计学意义（ｆ＝１．０３１，Ｐ＞０．０５）；酶底物定量法（Ｃｏｌｉｌｅｒｔ法）对１０株非大肠埃希菌检测的特异性为１００％。 结论大肠埃希菌酶底物定量法具备快速灵敏等优点，可以用作评价化妆品大肠埃希菌污染的一种快检方法，但后续研 究应加大化妆品样本量并进行检测。 关键词：大肠埃希菌；酶底物法；快速检测；化妆品 中图分类号：Ｒ１ １７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１—５９１４（２０１６）０９—０８１７—０３ Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｉｎ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ｗｉｔｈ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ＧＡＯ Ｆｅｉ ，ＢＡＩ Ｄｏｎｇ－ｔｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉｅ，ＷＡＮＧ Ｇａｎｇ—ｌｉ，ＣＨＥＮ Ｘｉ—ｐｉｎｇ，ＣＵＩ Ｓｈｅｎｇ—ｈｕｉ ＊Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏ１．Ｂｅｉｉｉｎｇ ｌｏｏｏ５ｏ．Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＣＵＩ Ｓｈｅｎｇ－ｈｕｉ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｕｉｓｈｅｎｇｈｕｉ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｍａｋｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ ｉｎ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｐｌａｔｅ ｃｏｕｎｔ ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｑｕａｌｉｉｆｅｄ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ｗｉｔｈ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒａｉｔｓ（ｅｍｕｌｓｉｏｎ，ｃｒｅａｍ， ｐｏｗｄｅｒ）ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｎｄ ｄｉｌｕｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｌｉｎｅ ａｎｄ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ ｒｅａｇｅｎｔ ｓａｌｉｎｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｕｎｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｈｙｇｉｅｎｉｃ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ（２００７）． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃｏｕｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓａｌｉｎｅ ｄｉｌｕｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ ｄｉｌｕｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｆ ＝ １．４２１，Ｐ＞０．０５）ａｎｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ（ｒ＝０．９７）．Ｉｎ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ（ｔ＝０．１３６，Ｐ＞０．０５），ｃｒｅａｍ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ（ｔ＝１．１６３，尸＞ ０．０５）ａｎｄ ｐｏｗｄｅｒ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ．ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｕｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓａｌｉｎｅ ｄｉｌｕｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ ｄｉｌｕｔｅｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ ｆｏｒ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ３０ ｓｔｒａｉｎｓ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｉｆｅｒｅｎｅｅ（ｔ＝１．０３１，Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ １０ ｎｏｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ １００％． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｃａｎ ｉｄｅｎｔｉｆｙ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃａｌｌｙ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｅｓｅｈｅｒｉｃｈｉａ ｅｏｌｉ；Ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ 粪大肠菌群（ｆａｅｃａｌ ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ）是一类主要生长于 卫生规范》（２００７）中规定的平板计数法，该方法检测 肠道中的革兰阴性短杆菌，是我国对化妆品进行卫生 时间相对较长，疑似阳性结果时需进行验证试验，试 学评价的重要粪便污染指示菌；粪大肠菌群主要由埃 验步骤需染色镜检及相关生化试验，步骤较为繁琐［２１。 希菌属组成，此菌属中与人类生活密切相关的仅有一 因此，使用快速定量的检测方法十分必要。固定底物 个种，即大肠埃希菌，作为粪便污染的指示菌，大肠埃 酶底物法（ｄｅｆｉｎｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）采用特异性 希菌检出的意义最大，其次是粪大肠菌群，总大肠菌 固定底物技术在２４ ｈ内即可得到准确结果，无需进 群的检出意义略差一些【”。通过对粪大肠菌群中大肠 行验证实验。该方法的原理为粪大肠菌群能够产生一 埃希菌的检测，可以推测该化妆品中存在大肠埃希菌 种可以水解Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂中荧光底物（ＭＵＧ）的Ｂ一葡 污染的可能性和传播疾病的危险性。因此，本实验选 萄糖醛酸酶，使培养液在波长３６５ ｎｍ紫外光下产生 择大肠埃希菌作为指示菌标准菌株。目前，我国对化 荧光，从而判断化妆品样品中是否含有粪大肠菌 妆品进行卫生学定量评价时，检测方法采用《化妆品 群。并且采用５ｌ孔ＭＰＮ（最可能数）法进行定量。因 此，笔者将酶底物法与平板计数法进行比较，为评价 ＤＯＩ：ＩＯ．１６２４１￣．ｃｎｋｉ．１００１－５９１４．２０１６．０９．０１８ 作者简介：高飞（１９８１一），男，助理研究员，从事微生物学研究。 化妆品粪大肠菌群（耐热大肠菌群）污染提供一种快 通讯作者：崔生辉，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｕｉｓｈｅｎｇｈｕｉ＠ａｌｉｙｕｎ．ｅｏｍ 检方法 环境与健康杂志２０１６年９月第３３卷第９期Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．９ １材料与方法 １．１ 实验对象实验中分别选用性状为霜剂、乳剂、 粉剂的进口化妆品，每种性状化妆品各选择２０件产 品，该６０件化妆品均经检验合格，不含有大肠埃希 菌。各取９ ｇ或９ ｍ１用含有中和剂的９０ ｍｌ灭菌生理 盐水稀释，加入ｉ ｍｌ水化后的大肠埃希菌进行预实验 后作为实验样品，要求每１０ ｍｌ化妆品加标样品中大 肠杆菌的数量在３０～３００ ＣＦＵ／Ｉｎｌ之间，每件样品同时 分别称取６０件不同性状的化妆品，每种取９ ｇ或９ ｍｌ， 分别加入到９０ ｍｌ含１ ｇ／Ｌ卵磷脂和７ ｇ／Ｌ吐温８０及 酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂的生理盐水（稀释液）中，充分混匀 后，加入大肠埃希菌菌悬液１ ｍｌ（细菌浓度均约为 １０ｚ ＣＦＵ／ｍ１），最终体积为１００ ｍｌ；充分混匀后，将加标 样品全部倒人５１孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘 背面以赶除空穴内气泡，而后使用封口机封口后置于 ４４℃培养箱中培养２４ ｈ。同时取大肠埃希菌菌悬液 １ ｍｌ进行琼脂平板涂布计数。 进行固定酶底物法与多管发酵法两种方法的检测。 １．２仪器与试剂 １．２．１仪器恒温培养箱（Ｅｔ本ＳＡＮＹＯ公司），程控定 量封口机（美国Ｉｄｅｘｘ公司），３６５ ｎｍ紫外灯（美国 １．３．２．３酶底物法检出限的评价取大肠埃希菌ＴＳＡ 平板新鲜培养物，用无菌生理盐水将培养物调成１．０ ＭＣＦ菌悬液，并对菌悬液进行１Ｏ倍梯度稀释，选取浓 度约为ｌＯ ＣＦＵ／ｍｌ、１０２ ＣＦＵ／ｍｌ、１０ ＣＦＵ／ｍｌ的稀释液 作为待测液，使用酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对上述稀释液进 行检测，同时对上述稀释液进行菌落平板涂布与计 数，计算酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂方法检出限。 １．３．２．４酶底物法特异性的评价取非大肠埃希菌 ＴＳＡ平板新鲜培养物，用无菌生理盐水将培养物调成 １．０ ＭＣＦ菌悬液，使用酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对１０株非 大肠埃希菌『沙门菌ＣＩＣＣ ２１４８２，志贺菌ＣＩＣＣ２１６７９， 铜绿假单胞菌ＣＭＣＣ（Ｂ）１０２１ １，粪肠球菌ＣＩＣＣ２３６５８， 弗氏枸橼酸杆菌ＣＭＣＣ（Ｂ）４８０１６，金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２６００３，蜡样芽孢杆菌ＣＭＣＣ６３５１ １，空肠弯曲菌 ＣＩＣＣ２２９３６，副溶血弧菌ＣＩＣＣ２１６１７，阪崎肠杆菌 ＡＴＣＣ ２９５４４］的菌悬液进行检测。根据检测阴性菌株 数及检测菌株总数，判断待确认方法的特异性： 特异性＝（酶底物方法检测阴性菌株数／检测菌株 总数）×１００％ １．３．３质量控制 阳性对照方法使用大肠埃希菌 ＡＴＣＣ２５９２２接种平板，同时转种于灭菌生理盐水中倾 注５１孔无菌定量盘封口后置于４４℃培养箱中培养 ２４ ｈ。 Ｉｄｅｘｘ公司），１００ｍｌ无菌取样瓶（美国Ｉｄｅｘｘ公司），５１ 无菌孔定量盘（美国Ｉｄｅｘｘ公司），麦氏比浊仪 （Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ公司）。 １．２．２试剂酶底物法采用２４ ｈ快速Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂 （美国Ｉｄｅｘｘ公司）；平板计数法采用卵磷脂一吐温８Ｏ 营养琼脂（国产，陆桥公司）、伊红美兰琼脂培养基（国 产，陆桥公司）、胰大豆蛋白胨琼脂（ＴＳＡ琼脂，美国 ＢＤ公司）、氯化钠（国产，陆桥公司）。 １．２．３ 实验菌株 ３株大肠埃希菌标准菌株 ＡＴＣＣ２５９２２、ＣＭＣＣ４４１１３、ＣＭＣＣ４４１０２均购自中国医 学细菌保藏管理中心。２７株食品分离菌株来自中国食 品药品检定研究院。１０株非大肠埃希菌均来自中国食 品药品检定研究院。 １．３实验方法 １．３．１加标菌液的制备配置含有１ ｇ／Ｌ卵磷脂和 ７ ｇ／Ｌ吐温８０的生理盐水（０．８５％氯化钠水溶液，卵磷 脂及吐温８０为中和剂）和含１ ｇ／Ｅ卵磷脂和７ ｇ／Ｅ吐 温８０及酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂的生理盐水（稀释液）。将 大肠埃希菌标准菌株在ＴＳＡ肉汤中复苏，于ＴＳＡ琼脂 平板上传代后用生理盐水配制菌悬液，使用比浊仪测 定菌悬液的初始光密度（ＯＤ）值为１．０ ＭＣＦ麦氏浊度， 将此浊度的菌悬液移取１ ｍｌ加入９ ｍｌ灭菌生理盐水 中，充分混匀后作为１Ｏ倍稀释的菌悬液，依照此法， 依次稀释至１０ 倍后取１ ｍｌ进行琼脂平板涂布计数， 得到的最终菌落数为２００ ＣＦＵ／ＩＫ。将此浓度的菌悬液 作为实验用大肠埃希菌菌悬液。 １．３．２加标化妆品的检测 １．３．２．１平板计数法以无菌操作，分别称取６０件不 同性状的化妆品，每种取１０ ｇ或１０ ｍ１分别加人到８９ ｍｌ生理盐水中，充分混匀后，加入大肠埃希菌菌悬液 １ ｍｌ（细菌浓度均为１０ ＣＦＵ，ｍｌ１，充分混匀后取１ ｍｌ用 平板倾注法计数，从细菌加标到倾倒平板于１０ ｍｉｎ内 完成后置于４４℃培养箱中培养４８ ｈ。 １．３．２．２酶底物法采用５ １孔定量盘法。以无菌操作， 将所有实验用液体、溶液各１ ｍｌ用普通琼脂倾注 法倾倒普通琼脂平皿作为阴性对照平皿，将阴性对照 平皿置于４４℃培养箱中培养２４ ｈ。 １．３．４结果判定５１孔定量盘结果读取时，如孔穴内 的样品变为黄色则表示该孑Ｌ穴中疑似含有大肠埃希 菌。将定量盘在暗处用波长为３６５ ｎｍ的紫外光灯照 射，有黄色反应的孔穴如有蓝色荧光产生则表示该孔 穴中含有大肠埃希菌。计算含有黄色反应及有荧光的 孑Ｌ穴数，对照ＧＢ５７４９－２００６（（生活饮用水卫生标准》 中的《５１孔定量盘法不同阳性结果的最可能数ＭＰＮ 及９５％可信范围》表查出其代表的大肠埃希菌最可能 数，结果以ＭＰＮ／１００ ｍｌ表示。 平板计数法结果直接进行平板计数，结果以 ＣＦＵ／１００ ｍｌ表示。 １．３．５统计学分析本实验采用￡检验和Ｐｅａｒｓｏｎ相 环境与健康杂志２０１６年９月第３３卷第９期Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．９ 关分析，以对比两种方法对化妆品中大肠埃希菌检测 的效率与相关性。数据整理统计方法使用ＳＰＳＳ １６．０ 软件与ＳＡＳ软件。 ２结果 义（￡＝０．０３６，Ｐ＞０．０５）；认为在该粉剂化妆品中，Ｃｏｌｉｌｅｒｔ 试剂对大肠埃希菌的生长无影响。 ２．５酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对３Ｏ株大肠埃希菌的检出 ２．１酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对大肠埃希菌生长的影响将 限将大肠埃希菌标准菌株与分离株的不同浓度菌 悬液，选取浓度约为１０ ＣＦＵ／ｍｌ、１０ ＣＦＵ／ｍｌ、１０ ＣＦＵ，Ⅱｌｌ、 １０。ＣＦＵ／ｍｌ的稀释液作为待测液，使用酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ 大肠埃希菌加标于含Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂的生理盐水中（稀释 液）与直接加标于生理盐水中比较，结果依据ｔ检验进 行判断，差异无统计学意义（ｔ＝１．４２１，Ｐ＞０．０５），认为 Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对大肠埃希菌的生长无影响；同时，对两 组数据进行Ｐｅａｒｓｏｎ相关性分析，样本相关系数为 ０．９７（ｚ＝２．１５０，Ｐ＜Ｏ．０００ １１。结果见表１。 表１ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对大肠埃希菌生长影响结果比较（ｎ＝６０，ｌｇｘ） 平板计数法 １．６０￣０．２８ 酶底物法 １．５８￣０．４０ 注： 与酶底物法比较，Ｐ＞０．０５。 ２．２酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对乳剂化妆品中大肠埃希菌 生长的影响 将大肠埃希菌加标于分别用生理盐水 和稀释液稀释后的乳剂化妆品。然后，分别按照平板 计数法与酶底物法进行计数，大肠埃希菌计数结果依 据样本ｔ检验进行判断，差异无统计学意义（拄 ０．１３６，Ｐ＝０．９６０）；认为在该乳剂化妆品中，酶底物 Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对大肠埃希菌的生长无影响，结果见表２。 表２ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对乳剂、霜剂、粉剂化妆品中大肠埃希菌 生长影响结果比较（ｎ＝６０，ｉ±ｓ，ｌｇｘ） 注： 与酶底物法比较，Ｐ＞０．０５。 ２．３ Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对霜剂化妆品中大肠埃希茵生长的 影响将大肠埃希菌加标于分别用生理盐水和稀释 液稀释后的霜剂化妆品。然后，分别按照平板计数法 与酶底物法进行计数，大肠埃希菌计数结果依据 样本ｔ检验进行判断，差异无统计学意义（￡＝１．１６３，Ｐ＞ ０．０５），认为在该霜剂化妆品中，Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对大肠埃 希菌的生长无影响，结果见表２。 ２．４酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对粉剂化妆品中大肠埃希菌 生长的影响结果见表２ 将大肠杆菌加标于分别用生理盐水和稀释液稀 释后的粉剂化妆品，分别进行计数，大肠埃希菌计数 结果依据样本ｔ检验进行判断，差异无统计学意 试剂对上述稀释液进行检测计数，结果表明３０株菌 的平均检出限为２１ ＣＦＵ／ｍｌ，同《化妆品卫生规范》 （２００７版）中的常规细菌平板计数相比较，依据样 本ｔ检验进行判断，差异无统计学意义（ ＝ｏ．０３６，Ｐ＞０．０５）。 结果见表３。 表３酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对３０株大肠埃希菌的 检出限（ｎ＝３０，ｌｇｘ） 方法 ±ｓ 酶底物法 １．３２￣０．１８ 平板计数法 ｌ－３３ｌ±Ｏ．１３ 注：ａ与平板计数法比较，Ｐ＞０．０５。 ２．６酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ试剂对１０株非大肠埃希菌的特 异性检测 酶底物Ｃｏｌｉｌｅｒｔ分析试剂对ｌ０株非大肠埃 希菌检测特异性结果为：１０／１０ｘ１００％＝１００％。 ３讨论 本研究采用样本ｔ检验法检验两组样本 是否来自具有相同均值的总体［３ｊ，检验结果证明酶底 物法与平板计数法在结果一致性方面无统计学意义 上的显著性差异，说明酶底物法可以作为评价化妆品 中微生物污染的一种快检方法。 依据ＧＢ５７４９－－２００６（（生活饮用水卫生标准》中的 《５１孔定量盘法不同阳性结果的最可能数ＭＰＮ及 ９５％可信范围》表所示，酶底物法检测化妆品中大肠埃 希菌最大检测值为２ ４１９ ＭＰＮ／１００ ｍｌ，适合化妆品检 测。相对于多管发酵计数法，实验人员只需按照《化妆 品卫生规范）（２００７）中粪大肠菌群检测方法对加标样 品进行稀释，而后加入Ｃｏｌｉｌｅｒｔ酶底物试剂于５ｌ孑Ｌ平 板中培养２４ ｈ后观察结果即可。 参考文献 ［１］王秀茹．预防医学微生物学及检验技术［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社，２００２：６７６—６７９． ［２］孙宗科，高飞，张伟，等．水中大肠菌群检测方法的等效性判定 ［Ｊ］．环境与健康杂志，２０１１，２８（４）：３５５—３５７． ［３］Ｉｌｓｔｒｕｐ ＤＭ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ［ＪＪ＿Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，１９９０，３：２１９－２２６． 收稿日期：２０１６—０４—２８责任编辑：杜宇欣
